Proyecto de investigación:
Nitrosaminas y óxido nítrico como derivados del metabolismo de los nitratos, su papel en la respuesta a la hipoxia mediada por hif y su implicación en la carcinogénesis.

Nombre del investigador responsable:
Rebeca Pérez Morales
Área de conocimiento:
Ciencias de la vida
Disciplina:
Biología molecular
Fecha en que inicia el proyecto:
30 de abril, 2015
Fecha en que termina el proyecto:
29 de abril, 2018
Tipo de financiamiento con que se realiza el proyecto:
Externo (otorgado por alguna institución distinta a la UJED).
Fuente de financiamiento:
CONACyT
Nombre de la convocatoria mediante la cual se obtuvo el apoyo (nombre, tipo y año).
Investigación científica básica 2014. CB-2014-01.

Información del protocolo

Protocolo

En el presente proyecto se propone tratar ratas con diferentes dosis de nitratos para generar hipoxia y cuantificar los niveles de metaHb y la concentración de nitrato/nitrito/NO. Se determinarán los cambios a nivel hematológico, hepático, metabólico y tisular, así como biomarcadores de estrés oxidante generados por la intoxicación y su implicación en la homeostasis mitocondrial y en homogenados hepáticos. A nivel molecular se determinarán los niveles de proteína Hif1¿, Hif2¿ y Hif3¿ en fracciones citosólicas y nucleares, así como la expresión de los genes de respuesta Ldh, Sod2, Cyp2e1, iNos y Vegf, implicados en el metabolismo energético, balance del estrés oxidante y la vascularización. Recientemente se han destacado acciones benéficas de los nitratos/nitritos y NO, entre estos efectos se incluyen: protección contra la cardiotoxicidad generada por algunos fármacos, reducción de los efectos adversos en condiciones de isquemia-reperfusión y como tratamiento en ciertas enfermedades vasculares (Kevill, 2011, Xi, 2012), no obstante las concentraciones administradas son controladas, lo que no sucede en zonas contaminadas con altos niveles de nitratos. Además no queda claro si la exposición aguda o crónica puede promover la adaptación a la hipoxia vía la estabilización del HIF1 ¿para generar los cambios metabólicos, daño hepático y desbalance del metabolismo mitocondrial, aumentando la generación de RNS y ROS que pueden dañar al DNA e inducir la expresión de genes implicados en la respuesta adaptativa.

Objetivo general

Analizar el efecto de la formación de nitrosaminas y óxido nítrico como derivados del metabolismo de los nitratos, su papel en la respuesta a la hipoxia mediada por Hif1 y su posible implicación en la carcinogénesis

Objetivos específicos

  1. Cuantificar los niveles de metaHb generada por la intoxicación aguda con nitratos en un modelo murino (in vivo), así como los niveles de nitrato/nitrito/NO en plasma.

  2. Identificar las alteraciones hematológicas, hepáticas, metabólicas y tisulares durante el periodo de exposición.
  3. Analizar la presencia de biomarcadores de estrés oxidante (enzimas antioxidantes, relación GSH/GSSG, daño al DNA y a proteínas) en tejido hepático.

  4. Medir la actividad del complejo I mitocondrial para valorar la estabilización de los Hif, en tejido hepático.
  5. Determinar los niveles de proteína Hif1¿, Hif2¿ y Hif3¿ en fracciones nucleares y citoplásmaticas.
  6. Analizar la expresión de los genes de respuesta a hipoxia, Ldh, Sod2, Cyp2e1, iNos y Vegf en homogenados hepáticos.

Metas propuestas

  1. Establecer el modelo experimental para generar hipoxia por intoxicación con nitratos y analizar los indicadores hematológicos, bioquímicos y hepáticos.
  2. Evaluar los principales marcadores de estrés oxidante a nivel enzimático y no enzimático y correlacionarlos con marcadores de efecto como la formación de MDA, nitrotirosinación y daño al DNA
  3. Analizar los mecanismos de adaptación a la hipoxia generada por nitratos, a nivel molecular.

Fuente de la información

Dirección de Posgrado e Investigación

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